样本通过 PEEK 样本管引入电子束辐射灭菌的分选芯片中。在实验之间更换这些一次性耗材,即可控制样本间残留
鞘液管路组件是由 γ 射线辐照灭菌的鞘液管路组成,鞘液管路可连接到多个鞘液袋,并通过芯片连接器与芯片连接。
这种设计中没有流体泵和管路阀门,可视需要轻松更换鞘液管路。
独特的加压不锈钢鞘液罐包含可拆卸的支架,鞘液袋可安装于支架中。所有鞘液袋中的鞘液仅通过单一鞘液通道进入芯片
电子束辐射灭菌的分选芯片集成了流动室-喷嘴,可轻松安装和拆卸。
样本和鞘液通过入口注射到芯片微流控通道中。样本在芯片中流动时被激发激光检测,继而流过通道并以液滴形式进行分选。芯片直接连接到废液管路,可通过软件选项排除堵塞。
不同于需要拆卸喷嘴来进行手动清洁的传统系统,FX500 系统使用软件触发的自动清洗和灌注循环来清洗芯片。这样可实现连续使用,无需拆卸芯片。芯片提供 70µm、100µm 和 130µm 三种尺寸,便于研究人员根据细胞大小轻松调整系统。
在芯片装载器上安装分选芯片后便可开始进行系统设置。芯片一旦装载,鞘液、样本和真空管路便会立刻自动、无缝地连接到各自接口。
该产品利用索尼 Blu-Ray™ 专利技术来校准和跟踪激光位置,从而在设置期间自动校准芯片和激光并予以优化。系统每天会使用自动设置微球来调整芯片的 X 和 Z 位置,从而确保一致的结果。
该系统通过调整频率和液滴驱动装置自动校准液滴,以获得每种类型分选芯片的最佳断点 (BOP)。
在管和板分选设置期间,系统将计算侧液流的角度和位置并进行调整,实现自动侧液流校准。这可确保分选液流自动居中进入收集管,无需手动调整。
系统专用激光和相机对含有自动设置微球的液滴的二值图像执行自动化实时分析,完成液滴延迟校准。专用算法通过计算微球位置和液滴延迟之间的关系,计算最佳的液滴延迟。
软件主动监控并调整液滴驱动装置以维持稳定的断点。这样可以实现持续良好的分选性能和堵塞检测,从而确保实现无人看管式操作。
功能区界面以逻辑方式组织功能,使用户能快速访问。以实验为中心的方法使得软件易于培训、学习和使用。软件操作直观,支持自动化采集和分析设置。软件生成 FCS 3.0 和 FCS 3.1 文件,这些文件也可导出到第三方分析工具。
软件向导包括带有带有逐步指导指导的工作流程,能够全程指导用户进行系统启动、多色补偿、分选和系统关机。
启动后,系统会在初始化期间运行诊断程序,确保所有子系统均正常工作。验证完毕后,仪器正面的 LCD 监视器会显示系统状态和绿色就绪消息。仪器正面的 LCD 监视器显示操作期间的状态信息。
该系统会自动精确对准分选芯片和激光,并使用自动设置微球校准液滴、侧液流和液滴延迟。
用户可以通过使用从最近的实验中选择的模板来创建实验。创建新模板时,指导性对话框提示用户选择实验设置,包括样本组、试管以及用于数据采集的脉冲参数。用户可以先设置补偿管,再开始采集。
数据将在工作表上显示为散点图、密度图和直方图,可使用设门标记细胞群体。软件提供多种工具来选择、调整、标记和检测目标细胞群体的统计数据。 数据可在软件内分析,或者导出为 FCS 3.0 或 3.1 格式,便于在第三方分析软件中使用。
在图中对颗粒进行设门后,可以分选目标细胞用于进一步分析。软件提供具有不同等级纯度和产率的不同分选模式以及单细胞分选模式,确保获得最佳的结果。所有分选控制均在简单对话框内管理。
FX500 默认支持分选到试管中。分选沉积系统可实现分选和精确沉积到 96 孔板、384 孔板以及其他类型的孔板中。索引分选软件可记录分选到多孔装置中的每个颗粒的 X 和 Y 坐标。该功使研究人员能跟踪每个孔中分选的每个细胞的散射和荧光强度。
该数据使用最终浓度为 2000 万/ml 的人血白膜层制备细胞。使用 Sony Biotechnology Inc. 的 10 微升人抗-CD45 APC(目录号 2120060)、抗-CD3 PE(目录号 2102040)、抗-CD8 FITC(目录号 2323520)和抗-CD4 PECy7(目录号 2102560)对细胞进行持续 30 分钟的染色。使用 70um 分选芯片,在 FX500 细胞分选仪上运行了染色后的样本。以 20,000 颗粒数/秒的颗粒率对 CD8+ 和 CD4+ 进行了分选,纯度 >99%,效率 >75%。