外泌体miRNA测序

       外泌体(Exosome)是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的膜性囊泡，存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、母乳、羊水等多种体液中，并携带有母细胞的多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能，是细胞和细胞间信息传递的重要方式。
       体液中外泌体 RNA（特别是 miRNA 等非编码 RNA）在健康与癌症中存在明显 的表达差异。因此外泌体里的 miRNA 常常成为某些疾病的 biomarker。

外泌体miRNA的主要优势：

1.外泌体是由活细胞分泌的，代表了活细胞内部的状态与通信信息输出，因此是较好的诊断疾病的生物标志物的载体；

2.miRNA装入外泌体或微囊泡中，有包膜包被，可保护不被降解，稳定存在于体液中；

3.外泌体在大部分体液中均存在，可反应人体的正常生理和病理状态。

华埔的服务：

1.Exosome捕获率高，样本需求量低。SBI ExoQuickTM试剂盒，实现了稳定的高纯度Exosome提取。

2.超微量小片段核酸建库测序方法，灵敏度全球领先。传统微量miRNA建库方法一般需要1μg total RNA，华埔通过改进建库方法，能对更低量的miRNA进行建库，并有效降低序列偏好性，使数据能够更真实地产出。

3.全流程服务：提供从外泌体分离、RNA抽提、文库构建、测序到生物信息学分析整套服务。

主要研究策略（以探究外泌体与化疗敏感相关性为例）：

1.收集具有差异化疗反应的肿瘤患者的外周血；

2.提取外周血中的外泌体并进行鉴定，提取外泌体内miRNA进行测序分析；

3.分析化疗反应良好与化疗反应不良患者血清外泌体中miRNA的差异表达；

4.通过生物信息学分析差异miRNA的靶基因其在癌症中的转录失调和PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路以及泛素介导的蛋白水解、癌症中的胆碱代谢等通路；

5.寻找外泌体miRNA分子作为不同化疗敏感性的肿瘤的可靠生物标志物，或可提示与治疗反应的关系；


优点：与临床信息密切结合，科研成果对临床具有重要指引作用；且具有一定的创新性，发表SCI较为容易。

技术参数：

样本类型：血清、血浆、尿液、细胞培养上清等

分析内容：

1.外泌体的提取与外泌体miRNA测序分析；

2.数据产出统计和质量评估；reads与参考序列比对；

3.基因表达丰度统计以及基因表达水平分析，差异表达基因筛选；

5.差异miRNA靶基因预测以及靶基因GO富集分析；

6.差异miRNA靶基因Pathway富集分析。